土壤放线菌分离方法的详细介绍( 二 )
第三 ， 绝育 。待消毒物品堆放好后盖上锅盖 。在98千帕和121℃下灭菌20分钟 。灭菌后 ， 取出锥形瓶 ， 让其中的培养基自然冷却凝固后再使用 。
4.对操作人员进行消毒 ， 先用紫外线照射30分钟 ， 然后供气 ， 关闭紫外线灯 ， 改用荧光灯 ， 对手用酒精消毒 ， 培养基表面用酒精消毒 。准备就绪后 ， 接种疫苗 。并应在酒精灯旁操作 ， 以免污染 。镊子应在双孔消毒器上消毒 。
4.接种后应放置工作台 ， 将培养瓶拿到培养架上进行阳光培养 。
5.放线菌的提取步骤
5.(1)称取2.00克土壤样品 ， 将其加入100毫升锥形瓶中 ， 锥形瓶中装有48毫升无菌水和火焰旁边的玻璃珠 。振荡20-30分钟 ， 使样品的菌体、孢子或孢子均匀分散 。静置20-30秒 ， 标记为1号 。
6.(2)按一定梯度稀释(本实验采用10倍梯度)(1)取3个25ml锥形瓶 ， 每个装9.5ml无菌水 ， 依次标记 。
4.②在超净台上 ， 用微量吸管从1号锥形瓶中取出0.5毫升土壤悬浮液 ， 加入2号锥形瓶中 。摇匀后 ， 用微量吸管从2号锥形瓶中取出0.5毫升土壤悬浮液 ， 加入3号锥形瓶中 ， 以此类推 。
7.将土壤悬浮液分别配制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9和10-10份土壤稀释液 。
6.稀释涂布法分离土壤中的放线菌
8.(1)倒入平板
9.将制备好并灭菌的高1号培养基加热融化 。冷却至55-60℃后 ， 向高的1号培养基中加入1毫升0.5%重铬酸钾 ， 然后分别倒入平板 。方法是在洁净的工作台上 ， 右手拿着一个装有培养基的三角烧瓶 ， 放在火焰旁边
侧面 ， 左手拿盘子 ， 松开软木塞 ， 用手掌边缘和小指、无名指夹出 。将三角瓶的瓶口放在火焰上消毒 ， 用左手打开一个缺口 ， 盖住火焰附近的培养皿 ， 快速倒入约15毫升培养液 ， 盖上后轻轻摇动培养皿 ， 使培养基均匀分布放置在桌面上 ， 浓缩后成为平板 。总共制备了6个板(3个平行样品用于一次稀释) 。
10.(3)涂覆平板
11.用1毫升无菌吸管分别准确吸取10-4、10-5、10-6的1毫升稀释菌液 ， 放入有编号的无菌培养皿中 ， 每个浓度对应两个平板 。用无菌涂布棒将加入平板培养基的土壤稀释剂均匀地涂在整个平板表面(从小浓度液体开始) ， 并用酒精灯对一个平板进行灭菌 。
文章插图
12.(4)翻转平板
13.倒置培养基板(防止滴在皿盖的冷凝水下) ， 并将其置于28℃的培养箱中3天
14.连续划线:选择带样品的接种环在平板培养基上连续划线 。
15.放线菌的纯化
16.(1)如上所述倒入平板
17.(2)在平板上划线
18、将蘸有菌种的接种环放在平板培养基上做z线划线 ， 每排都要充分烧掉接种环烧掉残留的微生物 ， 然后从最后一行开始到下一行结束 。划线后 ， 盖上培养皿 ， 倒置并在培养箱中培养 。
6、观察放线菌的玻璃纸法
【土壤放线菌分离方法的详细介绍】19.将玻璃纸切成培养皿大小 ， 用旧报纸层压并消毒 。
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