土壤放线菌分离方法的详细介绍 _放线菌

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放线菌可以产生抗生素，抑制其他菌种的生长，下面我们一起来看看土壤中放线菌的分离方法详情介绍。

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土壤放线菌分离方法的详细介绍
土壤放线菌的分离纯化
一、实验目的
1、MS培养基的制作方法，掌握母液的保存方法。
2.掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和洁净工作台的使用。
4.掌握放线菌分离、纯化和染色的基本流程；
5.掌握高一号培养基的配制方法；
6.复习分离纯化放线菌的基本操作技术，学会使用高压蒸汽灭菌器。
7.培养微生物实验的设计思路和实践能力。
二、实验材料
高压蒸锅、培养瓶、石斛愈伤组织、洁净工作台、酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称重纸、烧杯、量筒、
显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀
三、实验原理
植物组织培养又称离体培养，是以植物细胞全能性理论为基础，利用离体器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)进行培养。)和组织(如形成层、表皮、皮层、骨髓细胞、胚乳等。)
或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等。)和原生质体在无菌和适宜的人工条件如人工培养基和温度下可诱导愈伤组织、不定芽、不定根，最终形成完整植株。

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四.实验步骤
1.准备8L MS培养基，称取土豆1600克、香蕉400克、蔗糖240克、活性炭8勺半、琼脂80克，准备
母液。2、配制培养液应注意:
(1)使用预先准备好的母液时，在计量各种母液前，轻轻摇动装有母液的瓶子。如果发现瓶内有沉淀物、悬浮物或微生物污染，应立即消除，重新配制；为防止母液被微生物污染，有机母液在4℃冰箱保存；
(2)在用量筒或移液管测量培养基的母液之前，必须用测量的母液冲洗量筒或移液管两次；
(3)测量母液时，最好将各种母液按被测顺序写在纸上，测量一个，划掉一个，以免出错。用粗秤称取溶解的琼脂9g、蔗糖30g ，放入1000mL搪瓷量杯中，加入750mL蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌至液体呈半透明状。然后将准备好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加入蒸馏水至恒量1000毫升，搅拌均匀。
需要注意的是，在加热琼脂和配制培养基的过程中，操作人员一定不能离开，否则煮沸的琼脂会溢出，需要重新称重配制。另外，如果没有搪瓷量杯，可以用大烧杯代替。然而，应该注意的是，烧杯底部的外表面不应该被水弄湿。
否则加热时烧杯容易爆裂，导致溶液溢出燃烧。调节酸碱度时，用滴管吸取浓度为1摩尔/升的氢氧化钠溶液，搅拌下滴加到溶解的培养基中，随时用酸碱度试纸测量培养基的酸碱度，直到培养基的酸碱度调节到6左右(5.8~6.5) 。培养基的包装溶解的培养基应该趁热包装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，再将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50毫升或100毫升)中。注意不要让培养基粘在瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5 ~ 1/4 。每1000毫升培养基可分为25 ~ 30瓶。培养基分装后，瓶口要及时密封。瓶口盖上2张硫酸纸(每张约9cm×9cm大小) ，中间夹一张薄牛皮纸，用细绳扎好。最后，在锥形瓶外壁贴上标签。

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3.高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下步骤。
首先，将圆锥形瓶子堆叠起来。将装有培养基的锥形瓶竖立在小金属筐中，然后放入高压蒸汽灭菌锅内。如果没有小金属筐，可以在两层圆锥形瓶子之间放一块玻璃板，将它们分开。
第二，放置其他需要消毒的物品。将其他需要消毒的物品放入高压灭菌器中，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺旋盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上所有物品都要用牛皮纸密封)、用报纸、剪刀、手术刀、镊子、滤纸、铅笔等包裹的培养皿。