江苏龙网

  1. 主页 > 生活百科 > >

高效液相色谱基本原理 高效液相色谱分析( 二 )


目前液相色谱流动相脱气广泛采用离线超声振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在线true 空脱气 。
超声波脱气:将准备好的接流容器放入超声波水槽中脱气10-20分钟 。这种方法比较简单，基本能满足日常分析和操作的要求，所以目前仍被广泛使用 。
惰性气体鼓泡吹扫脱气:将气源(钢瓶)中的气体(氦气)缓慢均匀地通入储液槽中的流动相中，其他气体分子被氦气分子取代，但其在溶剂中的溶解度很小，微量氦气形成的小气泡对检测无影响 。
真空空脱气器:将流动相通过一段由多孔合成树脂膜制成的输液管，输液管外有一个真空空容器 。当真空泵空工作时，膜的外部被减压，小分子量的氧气、氮气和二氧化碳会由内向外进入膜中并被除去 。
图5 。true 空在线除气器示意图
3.梯度洗脱装置HPLC有两种方式:等度洗脱和梯度洗脱 。等体积洗涤信息资源联网是指在同一分析周期内，流动相的组成保持不变，适用于组分少、性质差异小的样品 。梯度洗脱是在一个分析循环中控制流动相组成的过程，如溶剂的极性、离子强度和pH值等 。它用于分析含有大量成分且性质差异很大的复杂样品 。梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分辨率，改善峰形，提高检测灵敏度，但往往会引起基线漂移，降低重现性 。由两种溶剂组成的梯度洗脱可以任意程度混合，即有多种洗脱曲线:线性梯度、凹形梯度、凸形梯度、阶跃梯度 。线性梯度是最常用的，特别适用于反相柱上的梯度洗脱 。
梯度:在一定时间内连续均匀地增加流动相的强度 。
步骤:直接从一种低强度流动相转换到另一种高强度流动相 。
梯度洗脱有两种实现方式:低压梯度(外梯度)和高压梯度(内梯度) 。
【高效液相色谱基本原理 高效液相色谱分析】高压梯度一般只用于二元梯度，即用两个高压泵将A、B流动相按设定的比例输送到混合器 。它具有精度高、易于实现自动控制的优点 。
图6 。高压梯度装置结构示意图
低压差只需要一个高压泵 。与等度洗脱输注系统相比，在泵的前面安装了一个比例阀，混合在比例阀中完成 。常压下混合容易形成气泡，所以低压差通常配有在线除气器 。
图7 。第四系低压系统结构示意图
4.采样系统使用早期隔膜和断流取样器，安装在色谱柱入口处 。目前多采用六通取样阀或自动取样器 。取样装置要求:密封性好，死体积小，重复性好，保证集中取样，取样时对色谱系统的压力和流量影响小 。
一般来说，六通取样阀常用于HPLC分析 。六通阀有两种取样方法:部分填充法和完全填充法 。
①进样的部分充液法:进样量应不超过定量环体积的50%(最多75%)，每次进样体积应准确、相同 。这种方法的准确性和重复性依赖于注射器进样的熟练程度，并且容易产生进样引起的峰展宽 。
②完全充满液体法进样:进样量应不少于定量环体积的5~10倍(至少3倍)，以完全取代定量环中的流动相，消除壁效应，保证进样的准确性和重复性 。
图8 。六通取样阀结构原理示意图
5.分离系统分离系统包括色谱柱、保护柱和柱烘箱 。
色谱柱:色谱是分离分析的手段，分离是核心，所以负责分离的色谱柱是色谱系统的心脏 。色谱柱由柱管、压帽、套圈(密封圈)、筛板(过滤器)、接头、螺钉等组成 。色谱填料是制备后用于填充色谱柱的物质颗粒，通常为粒径为5-10的球形颗粒 。色谱柱根据用途可分为分析型和制备型，有不同的尺寸和规格:
①常规分析柱(恒定柱)，内径2~5mm(常用4.6mm，国内4mm、5mm)，柱长10 ~ 30cm；
②窄孔径(也称小直径柱和半微柱)，内径1~2mm，柱长10 ~ 20cm；
③内径0.2 ~ 0.5 mm的毛细管柱(也称微柱)；
④内径> 5 mm的半制备柱；
⑤实验室制备的柱，内径20~40mm，柱长10 ~ 30cm；
⑥生产制备柱:内径可达几十厘米 。
图9 。色谱柱结构示意图
保护柱:保护柱的主要作用是防止吸附性强的杂质污染柱子，从而延长柱子的寿命 。对于不同类型的色谱柱，应选择相应填料的保护柱 。需要注意的是，柱芯寿命较长，应定期更换 。
柱烘箱:保持色谱柱温度恒定，避免保留时间的变化，保证分离效果的稳定 。
6.探测器检测器是连续监测色谱柱分离出的流出液的组成和含量变化的装置，是高效液相色谱仪器的三大关键部件之一 。惠普信息资源网LC的检测器要求灵敏度高，噪声低(即对温度、流量等外界变化不敏感)，线性范围宽，重复性好，应用范围广 。


推荐阅读


上一篇：牵牛花知多少 牵牛花的资料

下一篇：快手|抖音、快手封禁唐山打人事件蹭热点账号：极大损害平台正常秩序