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引物探针问题 怎样消除引物二聚体( 二 )


NTC放大当引物二聚体形成时 ， 如果使用与DNA双链结合的染料 ， 在NTC反应中也可以观察到荧光信号 。在另一种情况下 ， 在存在污染物的情况下 ， 无论是基于探针或双链DNA结合染料的反应 ， 在NTC孔中也将观察到引物二聚体的扩增 。这可能是一个随机事件 ， 并不是所有的NTC都会被放大 ， 这通常是由不寻常的采样错误引起的 。如果在每个NTC反应中发生扩增 ， 很可能有一种或两种试剂被污染 。
问:如何防止或消除污染？
1.使用干净的工作台 ， 用含有核酸降解试剂的溶液擦拭工作台 。
2.使用含有dUTP和UDG的反应预混物降解预聚合酶链反应的产物 ， 防止预聚合酶链反应的污染 。
3.尝试用新的反应管替换不同来源的试剂 ， 在信息资源网上查找有问题的试剂 。
4.如果条件允许 ， 在不同的实验位点建立反应 ， 特别是当质粒用作对照时(质粒容易扩散 ， 难以去除) 。
【引物探针问题 怎样消除引物二聚体】实时定量聚合酶链反应分析确实需要时间来优化过程 ， 但花费的时间是值得的 。该分析结果不仅灵敏度最高、动态范围最大 ， 而且准确度高、效率高、重复性好 ， 为实验提供了可靠的数据 。


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