常见的限制性内切酶?限制性内切酶作用

半个世纪前,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制/修饰现象进行研究时,首次发现了限制性核酸内切酶Hind Ⅱ,限制性内切酶一经发现,便被人们开发作为研究生物分子的重要工具,引发生物工程等技术领域革命性变化 。实际上我们在前面《限制性内切酶-“分子手术刀”》中也有讨论过限制性内切酶的发展史和不同类型内切酶的特性 。但是你知道吗,关于内切酶,其实还有很多鲜为人知的小知识 。

常见的限制性内切酶?限制性内切酶作用

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一、内切酶命名书写规则
内切酶第一个字母是细菌属名的首字母大写,第二、三个字母是细菌种名的前二个字母小写,这些字母都要求斜体;如果同一生物种内又分为不同的血清型和菌株,其菌株名称的第一个字母用正体,并放在第三个字母后面 。例如,BspQⅠ读作Bsp Q One,是在球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)Q血清型中发现的第1种内切酶,如果同一菌株中有几种不同的内切酶时,则分别用罗马数字Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……来代表 。有时添加前缀R以区分限制性内切酶与它们细胞内的修饰酶 。因此,R前缀专指限制性内切酶,M前缀专指修饰酶 。当无歧义时,前缀R被省略 。
二、同裂酶和同尾酶
【常见的限制性内切酶?限制性内切酶作用】同裂酶,是来源于不同物种但能识别相同DNA序列的限制性内切酶,切割位点可以相同也可以不同 。同裂酶在基因工程的DNA重组中有重要的应用,尤其是在载体构建方面往往可以取得巧妙的应用 。ⅡS型内切酶中,就有多组同裂酶,比如BspQⅠ和SapⅠ,它们均识别GCTCTTC,但前者最适反应温度为50℃,而后者最适反应温度为37℃ 。
同尾酶,是来源于不同物种但能切割产生相同末端的限制性内切酶,一般是指能产生相同粘性末端的限制酶 。这里需要注意的是,所有平末端酶产生的末端均是相同的,但一般不把它作为同尾酶来研究 。故名思义,同尾酶是不同的酶,它们只是切割DNA产生的末端相同,同尾酶之间的识别序列可以相同也可以不同,在基因工程中识别序列不同的同尾酶的应用性最大 。
有趣的是,mRNA疫苗制备过程当中常用的ⅡS型内切酶是没有同尾酶概念的,因为ⅡS型内切酶对切割位点的序列没有要求,也就是说,识别序列外的位置可以是任意核苷酸的组合,单个酶的酶切末端序列就有256种可能,研究者可以通过调整酶切位点的碱基得到想要的非特定尾端 。
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诺唯赞可以提供2种ⅡS型限制性内切酶:Bsa I和BspQ I 。这2种酶可以特异性识别双链DNA位点(见图1)并进行酶切,可将模板质粒酶切线性化,作为mRNA体外合成模板,用于下一步mRNA合成 。
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图 1 常见IIS 限制酶酶切位点
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