抗体顶尖艾滋团队新冠抗体重磅研究结果：透露疫苗重要线索( 二 )
测试的血浆样本中 ， 88％和66％显示有针对RBD特异的IgG和IgM抗体（高于对照组至少2个标准差） 。 然而血浆样本中抗三聚体S蛋白的IgG和IgM抗体应答只有40％和21％（高于对照组至少2个标准差） 。 IgG和IgM抗体水平与样本是发病后多久采集、年龄、性别、病例或接触者之间没有显著差异 。 相反 ， IgG抗体与RBD和S蛋白的结合与症状的持续时间直接相关 ， 但IgM抗体与RBD和S蛋白的结合与症状的持续时间无关 。 最后 ， 对S蛋白的抗体水平 ， 性别间差异不大 ， 但是女性对RBD的IgG结合抗体的效果比男性低 。
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为了测量恢复性血浆的中和活性 ， 研究者使用假病毒测定法 ， 该方法使用携带纳米荧光素酶报告基因的HIV-1基病毒粒子和SARS-CoV-2 S蛋白 。 用半最大中和效价（NT50）衡量的队列中的中和活性总体水平通常较低 ， 无法检测到的为18％ ， 低于1000的则为78％ 。 NT50的几何平均值为212（算术平均值=850） ， 只有2个人的NT50达到5000以上 。 研究认为 ， 中和活性与症状的持续时间和症状严重程度相关 ， 但与症状 ， 年龄 ， 性别或病例/接触状态的发作相关的样品采集时间无关 。 值得注意的是 ， 结合RBD和S的IgG抗体的水平与NT50密切相关 。
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为了确定由SARS-CoV-2感染引发的抗体的性质 ， 研究者使用流式细胞仪从6名参与者的血液中分离出了带有结合RBD受体的B淋巴细胞 ， 这6名参与者中包括2名具有最佳抗体中和活性的患者 。 抗原特异性B细胞的频率由其结合藻红蛋白（PE）和BV711标记的RBD的能力确定 ， 在COVID-19恢复期的循环B细胞范围为0.07至0.005％ ， 但在对照组中无法检测到 。 研究者通过逆转录和PCR ， 从6名恢复期个体的单个RBD结合B细胞中获得534对IgG重链和轻链（IGH和IGL）序列 。 与人类抗体库相比 ， IGH和IGL基因有几个明显超标 。 IGH和IGL的V基因核苷酸突变的平均数分别为4.2和2.8 ， 这比从患有慢性感染的个体克隆的抗体中要低 ， 比如乙型肝炎或HIV-1 ， 并且类似于源自原发性疟疾感染或非抗原富集的循环IgG记忆细胞的抗体 。
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与其他人类病原体一样 ， 在所有测试的COVID-19个体中都有抗原结合B细胞的扩增克隆 。 总体而言 ， 复原IGH和IGL序列的32.2％来自克隆扩增的B细胞（范围为21.8-57.4％） 。 在不同个体中共享IGHV和IGLV基因特定组合的抗体占所有克隆序列的14％ 。 值得注意的是 ， 在不同个体中发现的一些抗体的氨基酸序列几乎相同 。 例如 ， 在不同个体中反复发现的具有IGHV1-58/IGKV3-20和IGHV3-30-3/IGKV1-39的克隆抗体的氨基酸序列 ， 同一性高达99％和92％ 。 研究者得出的结论 ， 对SARS-CoV-2RBD的IgG记忆反应在周期性克隆扩增的抗体序列中高度丰富 。
为了检查抗SARS-CoV-2抗体的结合特性 ， 研究者表达了34种代表性抗体 ， 其中24种来自克隆 ， 10种来自单体（3个参与者血浆中发现） 。 ELISA分析显示 ， 94％（34种抗体中的32种）以6.6ng/mL的半最大有效浓度（EC50）与SARS-CoV-2RBD结合 ，。 为了确定这些抗体是否具有中和活性 ， 研究者针对SARS-CoV2-Strunc假病毒进行了测试 。 在测试的32种RBD结合抗体中 ， 发现20种可以在纳克/毫升数量级的半最大抑制浓度（IC50）下有小中和 ， 浓度范围为4.4至709纳克/毫升 。 在个体中发现有效的中和抗体 ， 与血浆NT50无关 。 例如 ， 从血浆NT50值分别为5053和298的个体COV21和COV107获得了C002和C121 ， IC50分别为8.9和6.7ng/mL 。 最后 ， 具有共享IGHV和IGLV基因的抗体的克隆是最好的中和剂之一 ， 例如具有IGHV3-30/IGKV1-39的抗体C002 ， 这两个供体均具有最好的血浆中和活性 。 研究者得出的结论是 ， 即使具有中等血浆中和活性的人 ， 也具有产生有效SARS-CoV-2中和抗体的罕见IgG记忆B细胞 。
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