fic技术大江大河 fic技术( 二 )


5、什么是FACS 分析技术   FACS(fluorescence activated cell rting)即荧光激活细胞分离法,也即流式细胞仪细胞分选法 。支持一下感觉挺不错的
6、什么是PCR技术啊?   ⑴PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应 。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链 。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物′方向延伸,合成一条新的DNA互补链 。PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:DNA模板引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性退火延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板 。每完成一个循环需~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍 。⑵PCR的反应动力学: PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升 。反应最终的DNA 扩增量可用Y=(1+X)n计算 。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平(Y)均每次的扩增效率,n代表循环次数 。平均扩增效率的理论值为%,但在实际反应中平均效率达不到理论值 。反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA 片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,这种效应称平台期数、PCR 扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素 。大多数情况下,平台期的到来是不可避免的 。⑶PCR扩增产物 :可分为长产物片段和短产物片段两部分 。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链端是固定的,端被固定了止点,保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段” 。不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加,而“长产物片段”则以算术倍数增加,几乎可以忽略不计,这使得PCR的反应产物不需要再纯化,就能保证足够纯DNA片段供分析与检测用 。


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