江苏龙网

  1. 首页 > 生活 > >

缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？


在培养细胞时 ， 人们常常关注细菌和真菌的污染 ， 认为它们是细胞培养的主要干扰因素 。 但其实 ， 更严重的是支原体 的感染 ， 它的发生率非常高 ， 而且不易被发现 。 不仅普通光镜下无法发现支原体 ， 而且培养基也不容易变色 。 只有在污染的后期培养基才容易变黄 。 下图为支原体严重污染后的表现：
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图

那么 ， 支原体污染为什么发生率这么高？
细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关 。 实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源 。 这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上 ， 它们主要存在于人的口咽部 。 支原体也存在于人的头发、皮肤上 。 胰酶如果是猪来源的 ， 那么也可能存在猪鼻支原体 。 以下为支原体污染的主要途径 。
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图

因此 ， 对于实验室所培养的细胞 ， 应进行支原体的定期监测 。 德国MB公司『支原体常规PCR检测试剂盒』(如Venor? Gem OneStep试剂盒)是常用的支原体筛查用试剂盒 ， 可用于细胞培养中是否存在支原体污染的筛查 。
它具有以下的特点：
①高特异性 ， 270bp左右的一条阳性对照条带 ， 涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种 ， 操作简单 ， 结果易于观察 。 （根据16s rRNA序列的同源性比对 ， 该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体 。 ）
②高灵敏度 。
③试剂盒含内控对照 ， 可防止假阴性的发生 。
(2)操作步骤
下列图示以Venor? Gem OneStep支原体常规PCR检测试剂盒(一步法)( 货号：11-8050) 为例 ， 具体产品操作以说明书为准 。
第1步：样本处理
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图

第2步：试剂制备
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图
第3步：PCR体系建立
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图

第4步：启动PCR反应
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图

第5步：电泳结果分析
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图
【缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？】

191bp为内控对照条带 ， 表明PCR反应正常 。
当样本存在支原体严重污染时 ， 由于内控对照与支原体DNA存在竞争 ， 内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞103拷贝） 。
阳性对照中支原体DNA＞104拷贝 ， 内控对照条带会完全消失 。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的条带 ， 此条带不影响检测结果 。
如果待测样本对PCR产生抑制 ， 则内控对照条带变弱（和阴性对照相比） ， 此时应先进行DNA抽提 ， 然后再检测 。
缔一生物|科研人员为什么不能忽视支原体污染的存在？
本文插图


    推荐阅读


    上一篇：和珅|那些你未必知道的，乾隆皇帝的冷历史

    下一篇：曹操|曹操最欣赏的对手不是关羽，刘备才能真正匹敌，因为他太能装